01

蛋白質譜檢測

 

蛋白質是生(shēng)物體(tǐ)中至關重要的分子，其結構和(hé)功能對于生(shēng)命活動具有(yǒu)重要影(yǐng)響。蛋白質譜檢測作(zuò)為(wèi)一種先進的分析技(jì)術(shù)，為(wèi)我們提供了深入了解蛋白質的工具。它不僅可(kě)以幫助我們鑒定和(hé)定量蛋白質樣品，還(hái)可(kě)以揭示蛋白質的結構、修飾和(hé)相互作(zuò)用等信息，常見的質譜儀器(qì)主要有(yǒu)質譜質量分析儀（MS）和(hé)液相色譜（LC）等儀器(qì)，用于離子化、分離和(hé)檢測蛋白質樣品。

蛋白質質譜鑒定方法通(tōng)常使用串聯質譜（MS/MS）和(hé)液相色譜-質譜聯用（LC-MS/MS）等方法，其中，簡單蛋白樣本用MS/MS，混合複雜蛋白樣本用LC-MS/MS。兩種方法作(zuò)用原理(lǐ)相似：先将蛋白質利用蛋白酶消化成肽段，肽段在質譜儀中會(huì)離子化帶上(shàng)一定量的電(diàn)荷，離子檢測器(qì)可(kě)以鑒定各肽段的質荷比，從而獲知各肽段的相對分子質量；質譜儀會(huì)繼續打斷某些(xiē)肽段再次分析，生(shēng)成二級質譜，從而獲得(de)肽段的序列信息；通(tōng)過質譜數(shù)據庫比對分析，即可(kě)鑒定蛋白質。

蛋白質譜檢測主要有(yǒu)一下幾種應用，生(shēng)物制(zhì)品開(kāi)發：蛋白質譜檢測在生(shēng)物制(zhì)品的研發過程中起着重要作(zuò)用，可(kě)以幫助鑒定和(hé)驗證蛋白質産品的純度、結構和(hé)功能；生(shēng)物标志(zhì)物鑒定：通(tōng)過蛋白質譜檢測，可(kě)以發現與特定疾病相關的生(shēng)物标志(zhì)物，為(wèi)早期診斷和(hé)治療提供依據；藥物代謝研究：蛋白質譜檢測可(kě)用于研究藥物在體(tǐ)內(nèi)的代謝過程，揭示藥物的藥代動力學和(hé)藥效學特征。

根據質譜檢測原理(lǐ)，我們可(kě)以知道(dào)蛋白樣本制(zhì)備的過程至關重要，這決定了最終質譜結果的好與壞，而蛋白樣本制(zhì)備的關鍵就在于蛋白內(nèi)切酶的選擇了。

02

産 品 推 薦

 

本産品是質譜分析前處理(lǐ)時(shí)常用的蛋白分解酶即賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶，該酶可(kě)以特異性切除賴氨酸基團C末端的多(duō)肽，可(kě)用于蛋白測序分析和(hé)Lys-X化合物的酶合成。若同時(shí)使用賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶和(hé)胰酶，可(kě)更好地切斷賴氨酸基團的多(duō)肽，增加多(duō)肽的數(shù)量。産品已按照使用習慣做(zuò)成小(xiǎo)包裝，是方便使用的冷凍幹燥品。20 μg/支可(kě)用于100-200個(gè)樣品的凝膠內(nèi)消化。

03

應 用 實 例

 

分别采用胰蛋白酶（Tp）、賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶（Lys-C）和(hé)Tp與Lys-C 聯用進行(xíng)膠內(nèi)酶切的效果比較。

牛血清蛋白BSA的條帶（100 ng）通(tōng)過SDS-PAGE獲得(de)，然後分别用Tp、Lys-C 和(hé) Lys-C+Tp進行(xíng)酶切，再用MALDI-TOFMS法進行(xíng)分析。這些(xiē)蛋白酶的實驗效果見下表，這些(xiē)結果表明(míng)Lys-C酶解的漏切位點數(shù)（Missed Cleavage）最少(shǎo)。Tp酶解時(shí)加入Lys-C後，漏切位點數(shù)有(yǒu)所降低(dī)，同時(shí)，可(kě)以鑒定出更多(duō)的多(duō)肽。

表1：Tp、Lys-C 和(hé) Lys-C+Tp的結果對照

胰蛋白酶（Tp）（圖 ａ）和(hé)賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶（Lys-C）+Tp（ 圖 ｂ）

酶切後的質譜結果對照圖。

Lys-C+Tp酶切後，可(kě)以在m/z=2000時(shí)得(de)到吸收峰，而單獨的Tp酶切在m/z=2000時(shí)沒有(yǒu)吸收峰。該結果表明(míng) Lys-C 可(kě)以提高(gāo)測序覆蓋度。

産品數(shù)據來(lái)源富士膠片和(hé)光(廣州)貿易有(yǒu)限公司 

http://labchem.fujifilm-wako.com.cn/pdf/show/152.html