全國免費服務熱線：020-83487199
全國免費服務熱線：020-83487199
早上(shàng)，花(huā)草樹(shù)枝在露水(shuǐ)的滋潤下，顯得(de)精神煥發，散發出陣陣清香。小(xiǎo)鳥在枝
之前我們有(yǒu)幾期文章介紹了使用默克Amicon® Ultra超濾管的應用場(chǎng)景（分離外泌體(tǐ)、濃縮病毒），有(yǒu)很(hěn)多(duō)老師(shī)反饋了一些(xiē)超濾管使用時(shí)的問題，針對其中問的比較多(duō)的問題，小(xiǎo)編特意進行(xíng)了收集、整理(lǐ)。今天給大(dà)家(jiā)介紹超濾管的使用過程中，離心力g與RPM的換算(suàn)及常見問題的解答(dá)。
測量轉子的半徑
從離心機廠家(jiā)文件上(shàng)查閱轉子半徑，或像以下圖示這樣自己測量轉子半徑。
采用列線圖計(jì)算(suàn)RPM
繪制(zhì)轉子半徑和(hé)建議的RCF（離心力g）圖，連線确定RPM。
此列線圖實際是通(tōng)過右側的公式計(jì)算(suàn)得(de)出的。
Q1：Amicon® Ultra超濾管的膜材質是什麽？
A1：Amicon® Ultra超濾管的膜材質為(wèi)默克密理(lǐ)博特有(yǒu)的Ultracel®再生(shēng)纖維素膜，生(shēng)産工藝嚴格，截留分子量明(míng)确而精準，蛋白吸附損失最小(xiǎo)。
Q2：如果要用超濾的方法分離兩種蛋白，那(nà)麽這兩個(gè)蛋白的大(dà)小(xiǎo)需要相差多(duō)少(shǎo)？
A2：按照經驗，建議兩個(gè)蛋白的分子量要相差一個(gè)數(shù)量級（10倍）。
Q3：Amicon® Ultra超濾管可(kě)以用于病毒濃縮麽？
A3：可(kě)以。對于慢病毒推薦Amicon® Ultra 100 kDa； 對于腺病毒推薦Amicon® Ultra 50kDa。具體(tǐ)的操作(zuò)步驟可(kě)以參考病毒濃縮純化試劑盒FTLV00003和(hé)FTAV00003的産品使用說明(míng)書(shū)。另提供AAV（腺相關病毒）的制(zhì)備方法供參考。
Q4： Amicon® Ultrar超濾管可(kě)以用酒精消毒滅菌麽？
A4：Amicon® Ultra與70%乙醇是兼容的，但(dàn)是對滅菌處理(lǐ)的具體(tǐ)方法沒有(yǒu)做(zuò)相關的測試，所以無法提供更進一步的參考信息。建議采用Ultrafree無菌離心管對濃縮後的樣品進行(xíng)過濾除菌。
Q5：Amicon® Ultra超濾裝置是否可(kě)以用于高(gāo)壓滅菌？
A5：Amicon® Ultra都是采用熱封設計(jì)，不可(kě)以用高(gāo)壓高(gāo)溫滅菌。
Q6：Amicon® Ultra超濾管是否不含RNA酶？
A6：不保證超濾管不含RNA酶，建議用0.1% DEPC在37度浸泡2h，以完全滅活RNA酶；殘留的DEPC可(kě)以用Milli-Q®超純水(shuǐ)洗滌除去。
Q7：用Amicon® Ultra超濾管去除去污劑是有(yǒu)什麽需要注意的嗎？
A7：去污劑因其獨特的性質，當濃度大(dà)于臨界微團濃度（Critical Micelle Concentration, CMC）時(shí)，去污劑分子會(huì)聚集形成微團而改變分子構象，這有(yǒu)可(kě)能會(huì)影(yǐng)響去污劑的去除效果，具體(tǐ)的操作(zuò)步驟請(qǐng)垂詢默克密理(lǐ)博技(jì)術(shù)支持專線400-889-1988。
Q8：蛋白在濃縮時(shí)出現了沉澱，如何改進？
A8：蛋白如果濃縮過快或者過度濃縮都有(yǒu)可(kě)能引起蛋白沉澱。建議蛋白濃縮後的最終濃度不超過20mg/ml。對于對濃縮速度敏感而容易沉澱的蛋白，建議的改進方法是：
離心力降為(wèi)推薦離心力的30%-50%；
改用截留分子量更大(dà)的超濾管（如原本選用10k，此時(shí)可(kě)以選擇30k）；
在濃縮過程中取出超濾管，用槍頭反複吹吸幾次後再繼續濃縮；
體(tǐ)積較大(dà)的樣品可(kě)考慮選用攪拌式超濾杯，減少(shǎo)沉澱的發生(shēng)。
Q9：有(yǒu)時(shí)候用超濾離心管連水(shuǐ)都離不下來(lái)，可(kě)能是什麽原因？
A9： Amicon® Ultra超濾膜中含有(yǒu)微量甘油。 如果出現這種情況，請(qǐng)先用0.1N NaOH清洗再離心。最後用緩沖液或Milli-Q®水(shuǐ)再次清洗後甩幹。清洗後的濾膜應立即使用，如暫時(shí)不用，請(qǐng)保持潤濕狀态，避免重新幹燥。
Q10：說明(míng)書(shū)中推薦在室溫下進行(xíng)離心，考慮到蛋白的穩定性，是否可(kě)以在4℃進行(xíng)離心？
A10：可(kě)以，但(dàn)是低(dī)溫會(huì)增加蛋白樣品的粘性，導緻流速減慢，建議可(kě)将離心時(shí)間(jiān)延長到原來(lái)的1.5倍。
Q11：濃縮後發現濃縮液中沒有(yǒu)目的蛋白，可(kě)能的原因有(yǒu)哪些(xiē)？
A11：首先，Amicon® Ultra超濾管的蛋白最低(dī)起始濃度為(wèi)25ug/ml。請(qǐng)确保樣本的起始濃度大(dà)于這個(gè)濃度。其次，如果問題仍然出現，請(qǐng)不要丢棄樣本濾過液以便用于分析可(kě)能的原因：
· 如果目的樣本在濾過液中，那(nà)麽請(qǐng)排查：
a）是否選擇了合适截留分子量的超濾管（目的蛋白分子量的1/2或者1/3）？
b）使用的離心力是否是在限定範圍內(nèi)？如果使用的是rpm，請(qǐng)換算(suàn)成相應的g離心力，具體(tǐ)換算(suàn)方法請(qǐng)垂詢。
c）離心機最近是否有(yǒu)校(xiào)準過？
d）是否首次嘗試這個(gè)蛋白？如果能确保用同樣的超濾管對其它蛋白成功操作(zuò)的話(huà)，那(nà)麽有(yǒu)可(kě)能是這個(gè)目的蛋白的原因。有(yǒu)時(shí)蛋白會(huì)因其本身的一些(xiē)特性（構象差異）而影(yǐng)響濃縮效果，建議選用更小(xiǎo)截留分子量的超濾管（如原本選用30k，此時(shí)可(kě)以選擇10k）。
· 如果目的樣本也不在濾過液中，那(nà)麽：
a）蛋白樣本起始濃度是否大(dà)于25ug/mL？
b）用來(lái)确定樣本濃度的方法是什麽？是否可(kě)信？
c）目的蛋白是不是沉澱了？如果是，具體(tǐ)解決方法請(qǐng)參考上(shàng)面的關于蛋白沉澱問題的解釋。
Q12：如何對超濾管進行(xíng)去除內(nèi)毒素的處理(lǐ)？
A12：提供的超濾管是沒有(yǒu)經過去內(nèi)毒素處理(lǐ)的，同時(shí)由于內(nèi)毒素通(tōng)常以多(duō)聚體(tǐ)的形式存在，大(dà)小(xiǎo)在10-1000KD之間(jiān)不等，在超濾的過程中是無法去除的。可(kě)在實驗前通(tōng)過先用0.5M NaOH預清洗，随後用Milli-Q®水(shuǐ)/緩沖液清洗的步驟去除大(dà)部分內(nèi)毒素。關于針對Amicon®、Microcon®、Centricon®嘗試過的內(nèi)毒素去除方案，請(qǐng)垂詢默克密理(lǐ)博技(jì)術(shù)熱線（400-889-1988）。
Q13：用濃縮後的蛋白做(zuò)下遊分析時(shí)發現有(yǒu)幹擾，可(kě)能有(yǒu)哪些(xiē)原因？
A13：Amicon®Ultra超濾膜含有(yǒu)微量甘油。如果此成分幹擾分析，可(kě)用緩沖液或Milli-Q®水(shuǐ)預清洗。如果幹擾仍然存在，用0.1N NaOH清洗，然後用緩沖液或Milli-Q®水(shuǐ)再次清洗後甩幹。
Q14：懷疑濃縮過程中目的蛋白和(hé)超濾膜之間(jiān)可(kě)能存在非特異性吸附，如何改善？
A14：Amicon® Ultra超濾管使用的是再生(shēng)纖維素膜，這種材質是蛋白吸附最低(dī)的超濾膜。但(dàn)是對于一些(xiē)疏水(shuǐ)性蛋白或非極性蛋白，它們和(hé)膜的非特異吸附可(kě)能會(huì)增強。 對于這種情況，可(kě)以嘗試在實驗前對超濾管進行(xíng)封閉處理(lǐ)，詳細步驟請(qǐng)垂詢默克密理(lǐ)博技(jì)術(shù)熱線(400-889-1988)。也可(kě)以嘗試換成Amicon® Ultra 0.5或2來(lái)進行(xíng)實驗，通(tōng)過減小(xiǎo)膜面積來(lái)降低(dī)非特異性吸附。
産品數(shù)據來(lái)源默克生(shēng)命科學産品和(hé)服務解決方案-SigmaAldrich https://www.sigmaaldrich.cn/CN/zh
全系列産品均有(yǒu)現貨，歡迎來(lái)詢（020-83487199）！
當前位置：
招賢納士
資料下載
服務網點
聯系方式
複制(zhì)網址
郵件
QQ空(kōng)間(jiān)
新浪微博
騰訊微博
微信
人(rén)人(rén)網
搜狐微博
QQ好友(yǒu)
開(kāi)心網
飛信
豆瓣
一鍵分享
更多(duō)