超濾是大(dà)分子脫鹽、濃縮最方便的方法,重複性好,已經在蛋白、抗體(tǐ)、病毒、外泌體(tǐ)、核酸、囊泡等樣品制(zhì)備中建立标準操作(zuò)。
默克生(shēng)命科學旗下品牌Millipore的Amicon Ultra超濾管采用離心方式快速處理(lǐ)樣品,是很(hěn)多(duō)科研小(xiǎo)夥伴們每天要用到的基本裝備。但(dàn)是,在默克生(shēng)命科學團隊推出超濾管中文說明(míng)書(shū)(0.5、4、15)之前,我們發現近90%的使用者在選擇和(hé)使用過程中因為(wèi)缺乏必要信息而沒有(yǒu)獲得(de)最佳體(tǐ)驗,更重要的是,寶貴的樣本會(huì)遭受本可(kě)避免的損失!
· 選對截留分子量,事半功倍
如果目的蛋白是120kDa,請(qǐng)問應該選擇的超濾管規格是100k、50k,還(hái)是30k甚至10k?你(nǐ)采用1/2、1/3抑或1/6算(suàn)法?這些(xiē)沒有(yǒu)統一的說法,是因為(wèi)不同廠家(jiā)對膜的截留分子量的定義不同。Millipore超濾管采用其特有(yǒu)的再生(shēng)纖維素膜,定義為(wèi):一個(gè)确定NMWL 的超濾膜應該截留至少(shǎo)90% 以上(shàng)的這個(gè)大(dà)小(xiǎo)的球形分子,即100kDa的球形蛋白用100k的Ultracel再生(shēng)纖維素膜得(de)率超過90%。請(qǐng)仔細查看以下Millipore官方數(shù)據:
截留分子量選小(xiǎo)啦!看到這個(gè)表,你(nǐ)是否發現原來(lái)抱怨Millipore超濾管流速偏慢的根源來(lái)自對Millipore截留分子量定義的誤解?膜孔徑要小(xiǎo)于目的分子。因為(wèi)樣品分子形狀不同,為(wèi)了最大(dà)化樣品的回收,對于沒有(yǒu)參考的樣品,可(kě)以初步選擇截留分子量約為(wèi)目的分子分子量1/2的膜。
· 倒轉離心,最大(dà)化回收率
收取體(tǐ)積已經很(hěn)小(xiǎo)的濃縮好的樣品時(shí),你(nǐ)會(huì):
⊙ 購買最尖細的槍頭,把樣品吸回來(lái)
⊙ 濃縮倍數(shù)低(dī)一點,以便用槍頭把樣品吸回來(lái)
⊙ 反轉離心回收,獲得(de)最高(gāo)得(de)率
最後一個(gè),你(nǐ)答(dá)對了麽?
Millipore Amicon Ultra系列超濾管上(shàng)樣體(tǐ)積有(yǒu)0.5/2/4/15/70mL等五種,除了采用低(dī)吸附的管材和(hé)最低(dī)蛋白吸附的再生(shēng)纖維素超濾膜,其中0.5mL、2mL和(hé)70mL的規格還(hái)特别設計(jì)了反轉回收模式,以便使已經濃縮的樣品最大(dà)化回收。現在你(nǐ)總該知道(dào)為(wèi)什麽收到産品時(shí)會(huì)有(yǒu)兩個(gè)外管了吧(ba)~
· 脫鹽濃縮,一個(gè)超濾管搞定
濃縮用超濾管,脫鹽用透析袋或脫鹽柱,這是很(hěn)多(duō)實驗室一直沿用的實驗操作(zuò)。其實呢,超濾管做(zuò)“脫鹽+濃縮”,也是很(hěn)多(duō)蛋白操作(zuò)高(gāo)手的小(xiǎo)訣竅。Millipore中文官方說明(míng)書(shū)特别給大(dà)家(jiā)提示了這個(gè)方法——用更少(shǎo)的工具和(hé)更短(duǎn)的時(shí)間(jiān),減少(shǎo)轉移誤操作(zuò)和(hé)樣品損失,卻能獲得(de)更好處理(lǐ)效果,你(nǐ)get了嗎?
實驗材料 |
貨号 |
規格 |
Amicon Ultra-2, Ultracel-3 Membrane, 3 Kda; 24/Pk |
UFC200324 |
24/PK |
Amicon Ultra-2, Ultracel-10 Membrane, 10 Kda; 24/Pk |
UFC201024 |
24/PK |
Amicon Ultra-2, Ultracel-30 Membrane, 30 Kda; 24/Pk |
UFC203024 |
24/PK |
Amicon Ultra-2, Ultracel-30 Membrane, 30 Kda; 24/Pk |
UFC203024 |
24/PK |
Amicon Ultra-2, Ultracel-50 Membrane, 50 Kda; 24/Pk |
UFC205024 |
24/PK |
Amicon Ultra-2, Ultracel-100 Membrane, 100 Kda; 24/Pk |
UFC210024 |
24/PK |
Amicon Ultra 0.5Ml 3K 96Pk |
UFC500396 |
96/PK |
Amicon Ultra 0.5Ml 3K 500Pk |
UFC5003BK |
500/PK |
Amicon Ultra 0.5Ml 10K 96Pk |
UFC501096 |
96/PK |
Amicon Ultra 0.5Ml 10K 500Pk |
UFC5010BK |
500/PK |
Amicon Ultra 0.5Ml 30K 96Pk |
UFC503096 |
96/PK |
Amicon Ultra 0.5Ml 30K 500Pk |
UFC5030BK |
500/PK |
Amicon Ultra 0.5Ml 50K 96Pk |
UFC505096 |
96/PK |
Amicon Ultra 0.5Ml 50K 500Pk |
UFC5050BK |
500/PK |
Amicon Ultra 0.5Ml 100K 96Pk |
UFC510096 |
96/PK |
Amicon Ultra 0.5Ml 100K 500Pk |
UFC5100BK |
500/PK |
Amicon Ultra-4 4Ml 3K Nmwl 96Pk |
UFC800396 |
96/PK |
Amicon Ultra Centrifugal 4Ml 10K Nmwl 96Pk |
UFC801096 |
96/PK |
Amicon Ultra Centrifugal 4Ml 30K Nmwl 96Pk |
UFC803096 |
96/PK |
Amicon Ultra-4 50K Nmwl 96Pk |
UFC805096 |
96/PK |
Amicon Ultra Centrifugal 4Ml 100K Nmwl 96Pk |
UFC810096 |
96/PK |
Amicon Ultra 15Ml 3K Nmwl 96Pk |
UFC900396 |
96/PK |
Amicon Ultra 15ml 10K 96pk |
UFC901096 |
96/PK |
Amicon Ultra 15ml 30K 96pk |
UFC903096 |
96/pk |
Amicon Ultra 15Ml 50K 96Pk |
UFC905096 |
96/pk |
Amicon Ultra 15Ml 100K 96Pk |
UFC910096 |
96/pk |
Centicon plus -70 5K 8PK |
UFC700508 |
8/pk |
Centicon plus -70 10K 8PK |
UFC701008 |
8/pk |
Centicon plus -70 50K 8PK |
UFC705008 |
8/pk |
Centicon plus -70 100K 8PK |
UFC710008 |
8/pk |