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如何練就細胞計(jì)數(shù)神功?

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師(shī)姐~能幫我數(shù)下這最後一批細胞的數(shù)量嗎,我今天數(shù)了一天細胞,眼睛都花(huā)了,已經看不清了QAQ

你(nǐ)歇會(huì)兒吧(ba),現在都不用血球計(jì)數(shù)闆了。這次給你(nǐ)分享一個(gè)好物,不需要費眼睛,它自己就能測出細胞數(shù)量了。

哇塞!是什麽好物呢,快講講~

它就是我們默克出品的第三代手持式細胞計(jì)數(shù)儀Scepter3.0

 

細胞計(jì)數(shù)的重要性
01
 

對于大(dà)多(duō)數(shù)需使用細胞系的操作(zuò),如轉染、細胞融合技(jì)術(shù)、冷凍保存和(hé)傳代培養等,有(yǒu)必要在操作(zuò)前對細胞數(shù)進行(xíng)定量。因為(wèi)如果接種細胞的密度過高(gāo),實驗還(hái)沒結束細胞就會(huì)出現接觸抑制(zhì),影(yǐng)響細胞狀态,蛋白的表達也會(huì)受到影(yǐng)響;但(dàn)如果密度過低(dī)最後收集到的樣品過少(shǎo),檢測不到,我們要花(huā)額外的時(shí)間(jiān)等待細胞長到合适的密度。

 

使用相同數(shù)量的細胞将保持最佳生(shēng)長,并有(yǒu)助于使用細胞培養的程序标準化,這反過來(lái)也使結果具有(yǒu)更好的再現性。所以細胞計(jì)數(shù)非常重要,它是一個(gè)實驗成功的基礎。

 

文章開(kāi)頭提到的血球計(jì)數(shù)闆是以往細胞計(jì)數(shù)常用的方式,它的使用較為(wèi)耗時(shí),還(hái)易受操作(zuò)者主觀判斷的影(yǐng)響,并且某些(xiē)細胞類型,如形成簇的細胞類型,難以用這種方法計(jì)數(shù)。

 

Scepter™3.0細胞計(jì)數(shù)儀
02
 

 

現有(yǒu)的細胞計(jì)數(shù)設備可(kě)提供替代的細胞定量方法,這就包括我們的Scepter™細胞計(jì)數(shù)儀。

 

Scepter™細胞計(jì)數(shù)儀采用“計(jì)數(shù)金标準”庫爾特原理(lǐ)

  • Scepter感應器(qì)吸入精确的樣本體(tǐ)積;

  • 細胞穿過感應器(qì)小(xiǎo)孔時(shí),電(diàn)阻值增加。電(diàn)阻值的增加導緻電(diàn)壓的增加;

  • 每個(gè)細胞經過時(shí)引起的電(diàn)壓的增加作(zuò)為(wèi)一個(gè)脈沖被記錄下來(lái);

  • 用直徑和(hé)細胞數(shù)目繪制(zhì)直方圖,脈沖的大(dà)小(xiǎo)代表細胞的大(dà)小(xiǎo),脈沖的數(shù)目代表細胞的個(gè)數(shù)。

最大(dà)的特點

  • 計(jì)數(shù)精準,提供基于細胞大(dà)小(xiǎo)的直方圖(如上(shàng)圖);

  • 手持式體(tǐ)積小(xiǎo)巧;

  • 可(kě)以給出細胞體(tǐ)積;

  • 可(kě)以進行(xíng)複雜的混合型的細胞計(jì)數(shù);

  • 計(jì)數(shù)迅速,平均在30秒(miǎo)之內(nèi)完成計(jì)數(shù)(最快14秒(miǎo))。

 

檢測範圍與應用

03
 

基于細胞直徑以及樣品濃度的感應器(qì)選擇指南:

樣本濃度範

(個(gè)/毫升)

50,000-1,500,000個(gè)/毫升

10,000-500,000個(gè)/毫升

直徑範圍(µm)

4-20 µm 6-36 µm

适合測量的顆粒直徑範圍

5-15 8-25
感應器(qì)規格 40 µm 60 µm

 

人(rén)體(tǐ)細胞中最小(xiǎo)的是血小(xiǎo)闆,直徑隻有(yǒu)約2微米;最大(dà)的是成熟的卵細胞,其直徑在200微米左右,鴕鳥卵細胞甚至可(kě)以達到長15~22厘米,直徑14至15厘米。細胞的直徑和(hé)大(dà)小(xiǎo)會(huì)直接影(yǐng)響覆蓋度百分比,同樣的接種濃度,COS7和(hé)293細胞最終的覆蓋度有(yǒu)着極大(dà)的區(qū)别。

讓我們來(lái)看看在分離PBMC後和(hé)流式直接對比的數(shù)據:

外周血單個(gè)核細胞(Peripheral blood mononuclear cell, PBMC)是外周血中具有(yǒu)單個(gè)核的細胞,包括淋巴細胞和(hé)單核細胞。外周血單個(gè)核細胞主要的分離方法是Ficoll-hypaque(聚蔗糖-泛影(yǐng)葡胺)密度梯度離心法。

 

離心獲得(de)PBMC後分别染色通(tōng)過流式進行(xíng)分群(Lymphocyte 和(hé)Monocyte)和(hé)計(jì)數(shù),ScepterTM3.0的結果和(hé)流式在趨勢上(shàng)具有(yǒu)很(hěn)好的相關性。

無論是分群還(hái)是計(jì)數(shù)的回歸系數(shù)都達到了0.98以上(shàng)。Scepter3.0可(kě)以準确對PBMC細胞進行(xíng)計(jì)數(shù)和(hé)分群。

 

若您想了解更多(duō)信息,請(qǐng)添加東銳科技(jì)劉小(xiǎo)姐微信号:emma891021

 

 

 

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