原位雜交技(jì)術(shù)屬于核酸分子雜交的一種，是一種應用标記探針與組織細胞中的待測核酸雜交，再應用标記物相關的檢測系統，在核酸原有(yǒu)的位置将其顯示出來(lái)的一種檢測技(jì)術(shù)。

原位雜交的本質就是在一定的溫度和(hé)離子濃度下，使具有(yǒu)特異序列的單鏈探針通(tōng)過堿基互補規則與組織細胞內(nèi)待測的核酸複性結合而使得(de)組織細胞中的特異性核酸得(de)到定位，并通(tōng)過探針上(shàng)所标記的檢測系統将其在核酸的原有(yǒu)位置上(shàng)顯示出來(lái)。

當然雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補，所以不同來(lái)源的核酸單鏈隻要彼此之間(jiān)有(yǒu)一定程度的互補順序（即某種程度的同源性）就可(kě)以形成雜交雙鏈。

原位雜交的技(jì)術(shù)要點主要是：雜交最适溫度、雜交的嚴格性、保溫時(shí)間(jiān)、雜交促進劑。

雜交技(jì)術(shù)最重要的因素之一是選擇最适的雜交反應溫度。若反應溫度低(dī)于Tm10～15℃，堿基順序高(gāo)度同源的互補鏈可(kě)形成穩定的雙鏈，錯配對減少(shǎo)。

若反應溫度再低(dī)（Tm-30℃），雖然互補鏈之間(jiān)也可(kě)形成穩定的雙鏈，但(dàn)互補堿基配對減少(shǎo)，錯配對增多(duō)、氫鍵結合的更弱。如兩個(gè)同源性在50%左右或更低(dī)些(xiē)的DNA，調整雜交溫度可(kě)使它們之間(jiān)的雜交率變化10倍，因此在實驗前必須首先确定雜交溫度。

通(tōng)常有(yǒu)三種溫度可(kě)供試驗，即最适複性溫度、苛刻複性溫度及非苛刻複性溫度。

設置和(hé)調整雜交溫度是原位雜交的重要環節，雜交溫度應低(dī)于解鏈或融接溫度20～30℃，多(duō)數(shù)雜交Tm為(wèi)95℃，由于這一溫度對保存組織形态完整和(hé)組織切片的黏附将産生(shēng)不利影(yǐng)響，為(wèi)此在雜交液中常增加甲酰胺濃度來(lái)降低(dī)Tm值，因每增加1%甲酰胺濃度可(kě)降低(dī)0.72℃。

雜交的嚴格性影(yǐng)響雜交體(tǐ)穩定性的因素決定着雜交條件的嚴格性，一般認為(wèi)可(kě)通(tōng)過調節鹽濃度、甲酰胺濃度和(hé)雜交溫度來(lái)控制(zhì)所需的嚴格性。

雜交反應時(shí)間(jiān)在條件都得(de)到滿足的情況下，雜交的成敗就取決于保溫時(shí)間(jiān)。時(shí)間(jiān)短(duǎn)了，雜交反應不完成；時(shí)間(jiān)長了也無益，會(huì)引起非特異結合增多(duō)。一般雜交反應要進行(xíng)20小(xiǎo)時(shí)左右。

雜交反應時(shí)間(jiān)可(kě)随探針濃度的增加而縮短(duǎn)，雜交時(shí)間(jiān)過短(duǎn)會(huì)造成雜交不完全；雜交時(shí)間(jiān)過長會(huì)增加非特異性着色，一般都采用雜交孵育過夜的方法，在黑(hēi)暗環境下進行(xíng)，可(kě)避免光線對甲酰胺的電(diàn)離作(zuò)用。

惰性多(duō)聚體(tǐ)可(kě)用來(lái)促進250個(gè)堿基以上(shàng)的探針的雜交率。對單鏈探針可(kě)增加3倍，而對雙鏈探針、随機剪切或随機引物标記的探針可(kě)增加高(gāo)達100倍。而短(duǎn)探針不需用促進劑，因其複雜度低(dī)和(hé)分子量小(xiǎo)，短(duǎn)探針本身的雜交率就高(gāo)。

常見的雜交促進劑有(yǒu)硫酸葡聚糖、聚丙烯酸、酚、硫氰酸胍。其中硫酸葡聚糖和(hé)聚乙二醇因能用于固相雜交是目前最常用的雜交促進劑。

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系統可(kě)同時(shí)放置10種試劑，3個(gè)獨立的廢液口，并且具有(yǒu)動态混合試劑的功能，三個(gè)獨立操作(zuò)模闆，每個(gè)模塊4個(gè)載波片，也可(kě)以同時(shí)處理(lǐ)12張在玻片。系統放入載玻片，運行(xíng)即可(kě)。